核酸蛋白分离层析仪的纯化方法

　　沉淀法

　　（1）盐析沉淀法

　　这是根据不同蛋白质在一定浓度的盐溶液中溶解度降低程度不同，而达到彼此分离的方法，是蛋白质和酶提纯工艺中较早采用，且至今仍广泛应用的方法。

 

　　蛋白质易溶于水，因为其分子的-COOH-NH2和-OH都是亲水基团，这些基团与极性水分子相互作用形成水化层，包围于蛋白质分子周围形成1~100nm大小的亲水胶体，从而削弱了蛋白质分子之间的作用力。

 

　　当大量盐加到蛋白质溶液中，高浓度的盐离子（如硫酸铵的SO42-和NH4+）有很强的水化力，可夺取蛋白质分子的水化层，使之"失水"，于是蛋白质胶粒凝结并沉淀析出。

 

　　（2）等电点沉淀法

　　是利用蛋白质在等电点时溶解度较低，而各种蛋白质具有不同的等电点来分离蛋白质的方法，称为等电点沉淀法。

 

　　由于等电点时蛋白质的净电荷为零，失去了水化膜和分子间的相斥作用，疏水性氨基酸残基暴露，蛋白质分子相互靠拢聚集，易形成沉淀析出。

 

　　（3）有机溶剂沉淀法

　　此法原理是:与水互溶的有机溶剂(如甲醇、乙醇等)能使某些蛋白质在水中的溶解度显著降低。在室温下，有机溶剂不仅能够引起蛋白质的沉淀，而且伴随变性。

 

　　因此，通常要将有机溶剂冷却，然后在不断的搅拌下加入有机溶剂，以防止局部浓度过高，蛋白质变性问题就可以很大程度上得到解决。

 

　　用此法析出的沉淀一般比盐析法易过滤或离心沉降，分离后的蛋白质沉淀应立即用水或者缓冲液溶解，以达到降低有机溶剂的浓度的目的。此法在血液制品的制备过程中较多使用。