蛋白质纯化系统方法经典攻略 （一）

那么下面上海金鹏分析仪器有限公司为大家简单介绍一下蛋白质纯化系统方法经典攻略（一）：

不迷路

在结构研究和体外生物化学分析等很多实验应用中都需要用到纯化蛋白质。蛋白质可以从组织中获取，亦或更经常的是从模式生物中过量表达获得，如细*菌、酵母或哺乳动物细胞培养等。蛋白质纯化主要是根据它们各不相同的物理性质来从原料进行分离，其目的就是希望能浪费*少的杂蛋白，获得*多的功能蛋白质。一个好的蛋白质的纯化过程必须要将其纯化工艺步骤优化至*少。

建立蛋白质纯化工艺时，*重要的是需要考虑纯化得到的蛋白质应能满足其后续应用要求。蛋白质的数量及纯度都必须满足实验分析要求。而且，因为后续研究需要的是保持良好折叠结构的活性蛋白质，因此蛋白质行为的相关信息也需要考虑。在纯化及后续的保存过程中，很多处理方法都会对蛋白质的性质产生影响，如蛋白质的去折叠、聚集、降解和失活等。制定详细计划，在*短时间内完成蛋白质纯化，并在*稳定的条件下进行保存才算是成功地完成了其整个纯化过程。

每一步纯化过程中，蛋白质的溶液环境对其稳定性和活性的保持都非常关键。蛋白质应该保存在一个良好的缓冲液环境中，要避免突然的pH值变化，以其防止对蛋白质折叠状态、溶解性和活性造成不可逆的影响。
缓冲液是一种含有共轭酸/碱对的水溶液。缓冲液的pH值范围根据其pKa值决定。该pKa值定义为50%的分子为酸式结构，50%为碱式结构时的pH值 （图1）。

Tris 25°C的pKa值是8.06，表示当pH=8.06，50%的Tris是质子化（酸式结构），50%是去质子化（碱式结构）。
关于缓冲液的一个常规原则是，其pH值应保证在pKa值左右1个pH值单位范围内，从而保证其具有良好的缓冲能力。如此可以保证同时有足够的以酸式结构和碱式结构存在的分子在加入 H+ 或者 OH- 时可以将它们中和。这样，缓冲液就可以防止pH变化导致的蛋白质稳定性改变。

一种好的缓冲液必须具有以下特征  :

1、水溶性

2、化学稳定性

3、在所需pH范围内良好的缓冲能力

4、与分析和实验应用条件具有良好的兼容性

5、与其他溶质具有良好的兼容性

很多物质都可以用于生物缓冲液。*常使用的缓冲液成分通常具有接近中性的pKa值，可在生理pH值范围左右使用。表1列出了4种*常用的生物缓冲液、各自的pH值应用范围及各自可能对蛋白质纯化过程产生影响的优缺点。为保证足够的缓冲能力，这些缓冲液的浓度通常为25mM。

以上就是上海金鹏分析仪器有限公司为大家整理总结关于蛋白质纯化系统方法经典攻略（一）。
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