蛋白纯化通用问题（二）

那么下面上海金鹏分析仪器有限公司为大家简单介绍一下蛋白纯化通用问题（二）。


7、填料如何储存？
答：请参考说明书。大部分填料可以在 4-40℃ 储存，不可以冷冻，注意北方的冬天有时候室温低于零度，运输和储存应避免冻住。储存过程中，注意避免填料干掉，或低温产生气泡。
储存液 ：对于耐碱的层析介质，可以使用 0.01M NaOH 作为储存液 ；对于不耐碱比如亲和介质，一般是用 20% 的乙醇或 2% 苯甲醇作为储存试剂。


8、样品与缓冲液怎么脱气和过滤？
答:溶液和样品必须过滤（0.2um或者0.45um的滤膜过滤）和脱气，可以使用负压抽滤瓶过滤，并且在负压条件下保持10min脱气。脱气的方法还包括：超声15min以上或者使用注射用水配制缓冲液。对于小体积样品的过滤，可以使用高速离心的方式，吸取上清。


9、AKTA系统的清洗和保存？
答:按时清洗系统或遇到问题时清洗系统。用1M NaOH ，小流速清洗系统30min，之后立即用0.5M NaCl和去离子水将NaOH冲洗干净并且系统pH保持在中性。系统长时间不使用，需保存在20%乙醇中。


10、如何进行柱前压校准？
答:取决于柱位阀，断开所有流路，在system control-system-calibration-归零。


11、AKTA pure与prime plus的*大耐受压力？
答:pure 25是20Mpa，pure 150是5Mpa；prime plus 是1Mpa；紫外电导2MPa，PH电极耐压0.5MPa。


12、如何设置报警压力？
答：
系统配有多柱位阀：
可以检测柱子的柱前Pre C压力，柱后Post C压力，并且计算出Delta C压力。
分别设置Pre Column Pressure和Delta Column Pressure的压力报警保护柱子。

系统无多柱位阀：
先用管道代替柱子连接设备，在工作流速下测定系统本身的压力，此为空载压力。
Pre Column Pressure为Max Pre-Column Pressure和Max Delta Column Pressure+空载压力中较低值。


13、在正确设置了报警压后，层析柱接入AKTA，总是超压报警？
答：首先判断AKTA系统是否本身压力过高，在线滤膜或者反压阀堵塞，正常情况下反压阀空跑系统压力为0.2左右。如果系统没有问题，接入柱子出现超压，可能是柱子堵塞或者连接柱子的管线折弯造成超压，调整连接管线或者按说明书方式清洗层析柱。

以上就是上海金鹏分析仪器有限公司为大家整理总结关于蛋白纯化通用问题（二）。
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