液相色谱仪的使用方法

液相色谱仪的品牌、种类很多，各家的使用方法也不尽一样，主要看你是那一款的液相色谱仪，当初购买设备时，厂家的工程师会培训使用方法。液相色谱仪与结构仪器的联用是一个重要的发展方向。液相色谱-质谱连用技术受到普遍重视，如分析氨基甲酸酯农药和多核芳烃等；液相色谱-红外光谱连用也发展很快如在环境污染分析测定水中的烃类，海水中的不挥发烃类，使环境污染分析得到新的发展。

液相色谱仪的使用方法：

内容：

1  开机

1.1  打开电脑。

1.2  打开液相色谱各个模块的电源。

1.3  双击桌面“仪器—联机"，进入联机界面。

1.4  排气：

1.4.1  手动旋开泵处冲洗阀（逆时针旋转约1圈）。
1.4.2   右键单击“泵"图标区域，选择“方法…"选项，进入泵编辑画面，设流速：5ml/min（一般为3－5ml/min），点击“确定"。

1.4.3  右键单击“泵" 图标，点击“控制…"选项，选中“ON"，点击“确定"，则系统开始冲洗，直到管线内（由溶剂瓶到泵入口）无气泡为止，（一般为5分钟），切换通道继续冲洗，直到所有要用通道无气泡为止。

1.4.4  右键单击“泵" 图标，点击“方法…"选项，设流速：0ml/min，手动旋紧冲洗阀。

1.4.5  右键单击“泵"图标，点击“方法…"选项，按照方法要求选择合适比例的流动相，设流速：1.0ml/min。

1.4.6  同理右键单击“柱温箱"，“检测器"图标，点击“方法…"选项，按照方法的要求设置温度，波长，点击“控制" 选项，“ON"打开柱温箱和检测器。

2  编辑方法

2.1  点击“方法"－“编辑完整方法"开始编辑完整方法。

2.2  选中除“数据分析 "外的三项，进入下一选项卡。

2.3  方法信息：在“方法注释"中加入方法的信息（如：This is for test！）。进入下一选项卡。

2.4  泵参数设定：在“流速"处输入流量， 如1.0ml/min，停止时间：如10 min（该停止时间仅为做一个样品需要的时间），按照要求选择合适比例的流动相配比，如乙腈：水＝75：25，A为水，B为乙腈，则设置B：75％即可。进入下一选项卡。

2.5  自动进样器参数设定： 选择“洗针进样"----可以输入进样体积和洗瓶位置，进入下一选项卡。

2.6  柱温箱参数设定： 在“温度"下面的空白方框内输入所需温度，如：40度。进入下一选项卡。

2.7  UV检测器参数设定： 在“波长"下方的空白处输入所需的检测波长，如254nm。点击确定。

2.8   在“ 运行时选项表 "中，选中“ 数据采集"，点击“确定"。
2.9  从“方法"菜单，选中“方法另存为…"，输入一方法名，如“测试"，点击“确定。

3  单次采集

3.1  从“运行控制"菜单中，选择“样品信息"选项，选择合适的路径，在“数据文件"中选择 “前缀/计数器"，输入样品瓶的位置，点击“确定"。

3.2 基线平稳后约10分钟，从“运行控制"菜单中选择“运行方法"。

4  多次数据采集

4.1  按照步骤2 编辑完整方法。

4.2  点击“序列"－“序列表"，输入“样品瓶"“样品名称"，“进样次数"，选择合适的“做样方法"

4.3  点击“序列"－“序列参数"，选择序列数据的保存路径（序列会自动生成以“序列名称－时间"为名称的文件夹保存数据），数据建议以选择 “前缀/计数器"保存。

4.4  从“序列"菜单，选中“序列另存为…"，输入一序列名，如“测试"，点击“确定。

4.5  从“运行控制"菜单中选择“运行序列"。

5  数据分析（脱机状态使用）

5.1  双击“仪器 —脱机"图标 进入的脱机画面。

5.2  从“视图"菜单中，点击“数据分析"进入数据分析画面。

5.3  从“文件"菜单选择“调用信号"，选中您的数据文件名。点击“ 确定"，则数据被调出。（如预建立标准曲线，应先打开浓度较低的标样图谱。）

5.4  做谱图优化：从“图形"菜单中选择“信号选项"。从“范围" 中选择“满量程" 或“自动量程" 及合适的时间范围或选择“自定义量程" 调整。反复进行，直到图的比例合适为止。点击“ 确定"。

6  积分：

6.1  从“积分"菜单中选择“积分事件"选项，选择合适的“斜率灵敏度"，“峰宽"，“zui小峰面积"，“zui小峰高"。点击 ，自动加载积分参数。

6.2  点击左边“√"图标，将积分参数存入方法并退出“积分事件"。

6.3  如积分结果不理想，则修改相应的积分参数，直到满意为止。

7  标准曲线

7.1  点击“校正"－“校正设置"，输入“含量单位"。

7.2  点击“校正"－“新建校正表"，点击确定。输入“化合物名称"和“含量"，点击“确定"，按照提示删除其他组分。

7.3  至此完成单级校正，如要增加校正级别，应从“文件"菜单选择“调用信号"，选中您的数据文件名（第二个标样），点击“校正"－“添加级别"，点击确定，输入“含量"，依次增加校正级别。

8  打印报告

8.1   从“报告"菜单中选择“设定报告"选项，点击“定量结果"框中“定量"右侧的黑三角，选中“外标法"，其它选项不变，点击“ 确定"。

8.2  从“报告"菜单中选择“打印报告"，则报告结果将打印到屏幕上，如想输出到打印机上，则点击“报告" 底部的“打印"钮。

8.3  点击“文件"－“另存为"－“方法"，把数据分析方法保存，下次分析可直接在“文件"－“调用"－“方法"下，将该方法调出使用。（调用的方法中含有积分方法，标准曲线方法和打印报告方法）

9  关机

9.1  关机前，先关紫外灯，用相应的溶剂（甲醇或乙腈）充分冲洗系统大约30分钟。（色谱柱zui终应保存在甲醇或乙腈中）

9.2  退出化学工作站，依提示关泵，及其它窗口，关闭计算机。

9.3 关闭Agilent 1260各模块电源开关。

10  其它注意事项

10.1 当样品运行时，切勿打开自动进样器前遮盖，否则进样过程停止。

10.2 系统发生漏液时，机器会检测到并停止进样，状态指示灯为红色。检查擦干并安置好漏液处，擦干漏液传感器，单击ON按钮，系统重新初始化。

10.3 注意紫外灯使用寿命，切勿来回开关紫外灯。

液相色谱法只要求样品能制成溶液，不受样品挥发性的限制，流动相可选择的范围宽，固定相的种类繁多，因而可以分离热不稳定和非挥发性的、离解的和非离解的以及各种分子量范围的物质。与试样预处理技术相配合，HPLC所达到的高分辨率和高灵敏度，使分离和同时测定性质上十分相近的物质成为可能，能够分离复杂相体中的微量成分。随着固定相的发展，有可能在充分保持生化物质活性的条件下完成其分离HPLC成为解决生化分析问题zui有前途的方法。由于HPLC具有高分辨率、高灵敏度、速度快、色谱柱可反复利用，流出组分易收集等优点，因而被广泛应用到生物化学、食品分析、医药研究、环境分析、无机分析等各种领域。

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